羊棘球蚴(包蟲)病間接ELISA檢測試劑盒 Indirect ELISA Kit For Hydatid Disease
使用說明書
【簡 介】
試劑盒由抗原包被板、血清稀釋板、酶標二抗及其它試劑制成，利用間接ELISA方法檢測羊類血清中存
在的棘球蚴特異性抗體，從而推斷羊類是否患有細粒棘球蚴(包蟲)病。
【用 途】
適用于羊棘球蚴（包蟲）病的血清學診斷。
【原 理】
本試劑盒利用棘球蚴三種主要特異性抗原組成的混合抗原包被微孔板。在試驗中，若待測血清樣品中含有相應的抗體，則將與檢測板上抗原結合，形成抗原-抗體復合物。之后加入的酶標二抗將與檢測板上抗原抗體復合物發生特異性結合，并可使TMB底物溶液形成藍色產物。顯色反應經終止液終止后呈黃色，最終通過測定450nm波長下吸光度得到結果。
【試劑盒主要成分】
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1 抗原包被板
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2塊 96孔/塊
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2 陰性對照血清
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1管 50μl /管
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3 陽性對照血清
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1管 50μl /管
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4 酶標二抗
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2管 0.2ml/管
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5 25倍濃縮洗滌液
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1瓶 25ml/瓶
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6 底物溶液A
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1瓶 10ml/瓶
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7 底物溶液B
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1瓶 10ml/瓶
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8 終止液
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1瓶 10ml/瓶
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9 樣品稀釋液
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2瓶 30ml/瓶
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10血清稀釋板
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2塊 96孔/塊
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11說明書
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1張
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【樣品制備】
取動物全血，按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。
【試劑配制】
使用前，試劑盒內除酶標二抗外的各種試劑都應恢復到室溫（25?C左右）。25倍濃縮的洗滌液恢復至室溫或略微加熱后搖動使沉淀的鹽溶解，然后用去離子水作25倍稀釋，稀釋好的洗滌液在2～8?C可以存放7天。酶標二抗在使用前用樣品稀釋液按1:100倍稀釋，現配現用。
【樣品稀釋】
標準樣品與待檢樣品均在血清稀釋板中按1:40倍的體積稀釋（推薦稀釋方法：195μL樣品稀釋液中加5μL待檢血清樣品）。
【操作步驟】
1、取抗原包被板，分別將稀釋好的待檢樣品和對照樣品各取100μL加入到抗原包被板孔中，陰性對照和陽性對照各設2孔，置37?C溫育30分鐘。
2、甩掉板中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μL，靜置1分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共洗3次。
3、每孔加入稀釋好的酶標二抗100μL，置37?C溫育30分鐘。
4、甩掉板中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200μL，靜置1分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共洗3次。
5、每孔加入等體積混合好的底物溶液A 與底物溶液B 100μL，避光顯色10分鐘。
6、每孔加終止液50μL，10分鐘內測定450nm波長吸光度。
【結果判定】
參考農業部關于印發《2013年國家動物疫病強制免疫計劃》的通知，被檢抗體正向間接血凝實驗抗體效價≥25為陽性。根據該通知制定結果判定標準：
1 實驗結果同時滿足下列條件，方為有效：
標準陽性對照孔平均OD450nm≥0.6±0.02。
標準陰性對照孔平均OD450nm≤0.3±0.02。
2 細粒棘球蚴(包蟲)病血清學檢驗結果判定標準：
樣品OD450nm≤0.3，判為陰性，樣品暫未患有細粒棘球蚴(包蟲)病。
樣品OD450nm介于0.3與0.6之間，判為弱陽性，對應樣品處于細粒棘球蚴感染初期，尚未形成包囊或包囊不明顯。
樣品OD450nm≥0.6，判為陽性，對應樣品應處于細粒棘球蚴感染后期，并形成較明顯的包囊。
樣品OD450nm處于0.3±0.02或者0.6±0.02兩個臨界值范圍內，建議重復檢測，以確保結果準確。
【注意事項】
1 樣品OD450nm≥0.6時有可能是接觸大量抗原導致，而非患有包蟲病，請確認樣品未經抗原免疫。
2 本底過高可導致結果整體水平偏高，實驗過程需保證二抗清洗干凈。
3 環境溫度低于15?C可導致結果整體水平偏低，實驗過程需保證環境溫度盡量接近25?C，或適當延長底物液顯色時間。
4 底物液A和底物液B不要暴露于強光，避免接觸氧化劑。
5 濃縮洗滌液用去離子水稀釋，如果發現有結晶，應水浴加熱使其溶解。
6 酶標二抗應現配現用。
7 4?C過夜孵育樣品及酶標二抗可以獲得更好的結果。
【貯 存】 2～8?C避光保存
【有 效 期】 9個月
【生產企業】 重慶澳龍生物制品有限公司
【地 址】 重慶市榮昌縣昌元鎮昌州大道東段板橋四支路3-03
【郵 編】 402460
【技術服務】 023-85261707
【銷售熱線】 023-85261703（傳真）
